蛋白组定量

研究不同生理和病理条件下细胞内蛋白质的含量和状态变化是比较蛋白质组学的核心内容。iTRAQ(isobaric tags for relative and absolute quantitation)和 TMT(Tandem Mass Tags)分别是由美国 AB Sciex 公司和 Thermo 公司研发的多肽体外标记定量技术,是目前广泛运用的两种标记定量蛋白质组技术,分别通过与氨基酸末端氨基以及赖氨酸残基的游离氨基结合,实现对多肽的标记,经高精度质谱仪串联分析,可同时比较多达8种样品之间的蛋白表达量,并通过不同分子量的试剂对不同来源样品进行标记,实现不同样品间蛋白质组比较的目标。

蛋白质组标记定量iTRAQ&TMT

研究不同生理和病理条件下细胞内蛋白质的含量和状态变化是比较蛋白质组学的核心内容。iTRAQ(isobaric tags for relative and absolute quantitation)和 TMT(Tandem Mass Tags)分别是由美国 AB Sciex 公司和 Thermo 公司研发的多肽体外标记定量技术,是目前广泛运用的两种标记定量蛋白质组技术,分别通过与氨基酸末端氨基以及赖氨酸残基的游离氨基结合,实现对多肽的标记,经高精度质谱仪串联分析,可同时比较多达8种样品之间的蛋白表达量,并通过不同分子量的试剂对不同来源样品进行标记,实现不同样品间蛋白质组比较的目标。


  服  务  优  势  

♕ 重复性好:组间重复性可达90%以上;

♕ 灵敏度高:分级分离,降低样品复杂度,检测出较低丰度蛋白;

♕ 数据丰富:一次实验可得到上千个蛋白的定性和定量信息;

♕ 体外标记技术,适用于大部分生物样本的蛋白质差异分析:胞浆蛋白、膜蛋白、核蛋白、胞外蛋白等;

♕ 自动化程度高:液质连用,自动化操作,分析速度快,分离效果好;

♕ 通量高:iTRAQ可同时标记8个不同样品,TMT最多可标记10个样品,特别适用于采用多种处理方式或来自多个处理时间的样本的差异蛋白分析;

♕ 结果可靠准确:定性与定量同步进行,同时得出鉴定和定量结果,重复样品间的蛋白表达量相关性高。



应用方向


药物作用靶点研究;

疾病标志物筛选;

植物胁迫/抗逆研究;

物种蛋白质草图构建。


  服  务  流  程 

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iTRAQ 8-plex定量蛋白组学分析流程






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样本量要求


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技术参数


检测平台:

Thermo Scientific Q Exactive 图片关键词


蛋白鉴定总数:

iTRAQ:5000以上

TMT:8000以上


服务周期

50个工作日


服务内容


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分析流程


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  • 原始数据质控;

  • 蛋白质谱搜库检索;

  • iTRAQ鉴定:包括鉴定结果统计、重复性分析、Unique肽段数分布、肽段长度分布、蛋白覆盖度分布;

  • iTRAQ定量:包括定量信息统计、蛋白质丰度比(FC)分布、表达量层次聚类分析;

  • 蛋白质功能注释:包括GO注释、COG注释和Pathway代谢通路注释;

  • 差异蛋白的富集分析:包括差异蛋白的GO富集分析、差异蛋白的Pathway富集分析;

  • 定制化分析:PPI分析。



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结果展示


差异蛋白火山图

 

差异蛋白聚类热图



 

GO富集柱状图

 

差异蛋白KEGG富集气泡图


 

KEGG富集通路图

 

蛋白互作网络图




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文献案例


  • Wang K, Shan Z, Duan L, et al. iTRAQ-based quantitative proteomic analysis of yamanaka factors reprogrammed breast cancer cells. Oncotarget, 2017, 8(21):34330-34339.





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