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代谢组学样本收集全面指南!

发布日期:2021.03.09


       样本采集是代谢组学研究的第一步,只有对样本进行正确、合理地收集、保存,才能确保后续的检测和分析更加真实可靠。可用来做代谢组学的样本多种多样,常见的有以下几大类: 动物或临床血样(血清、血浆)、尿液、粪便、组织,植物器官、细胞及其培养基、微生物细菌、真菌及其发酵液等。今天,小编带大家看一下这些样本要怎样收集保存呢?


血液样本收集


1.血浆样本收集:

(1)从合适的静脉采集血液(典型10mL)到标记的肝素锂血浆收集管中(肝素锂用作抗凝

剂)。

(2)立即于4 °C离心(3000g)20min,上清液即为血浆。

(3)离心完毕,取出血浆收集管,取上清液(血浆),分等份(0.5mL或0.1mL),转移到冻存管中(冰上),旋盖。

(4)保存于-80℃冰箱。寄样需足量干冰。

2.血清样本收集:

(1)从合适的静脉采集血液(典型10mL)到血清收集管中。

(2)将血清收集管冰水浴(4℃)凝集至少1h(2h以内),记录凝集时间。

(3)将血清收集管放到冷冻离心机中低温(4℃)离心15min(2500 g);。

(4)离心完毕,取出血清收集管,取上清液,分等份(0.5mL0.1mL),转移到冻存管中

(冰上),旋盖。

(5)保存于-80℃冰箱。寄样需足量干冰。


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注意:

(1血液离开动物或人体后,应尽快开展血清、血浆的分离,并严格按照操作说明进行。

(2)采集到的血清为黄色透明液体、血浆为淡黄色半透明液体,如果发现样本中是红色,说明在已经发生了了溶血现象,样本需重新制备。

(3)血清与血浆的主要区别在于血清中不含纤维蛋白原。血清和血浆中脂质,氨基酸,核苷酸等代谢谱存在差别。



粪便样本收集


1.人粪便:

(1)用无菌勺挖取新鲜的,排泄中后部的内侧粪便(避免尿液及其他壁对样本污染);

(2)分装样本20mg/管。

(3)迅速放入液氮中冷冻处理至少15min.

(4)-80℃冰箱冻存。寄样需足量干冰。

2.小鼠粪便:

(1)待测的小鼠排便后,立即用灭菌的镊子夹取。

(2)收集小鼠粪便6-8粒,转入冻存管。

(3)为避免反复冻融,样本可用无菌棒混合均匀后20mg/管进行多管分装。

(4)-80℃冰箱冻存。寄样需足量干冰。



尿液样本收集


尿液:

(1)晨起中段尿(临床)或晨间1h尿(动物)直接分装到离心管中,每管1mL。

(2)添加质量体积为1/100(w/v)的叠氮化钠。

(3)收集完尿液样本后,用液氮淬灭15 min后,再分装多管。

(4)-80 ℃冰箱冻存。寄样需足量干冰。



组织样本收集


组织样本:

(1)如果组织上有血,先用用生理盐水漂洗掉。

(2)根据具体实验设计取特定的部位,再用生理盐水冲洗干净。

(3)用干净的无尘吸水纸吸干水分,20mg/管装入标记好的离心管中。

(4)迅速放入液氮中冷冻淬灭至少15min.

(5)-80℃冰箱冻存。寄样需足量干冰。 



脑脊液、关节液和淋巴液等样本收集


脑脊液、关节液和淋巴液等:

(1)1000rpm-2000rpm 离心 5min(或使用 0.22um 滤膜过滤)。

(2)取上清分装入标记好的离心管中(保证单个样本量在20μL以上)。

(3)-80℃冰箱冻存。寄样需足量干冰。



植物样本收集


植物样本:

(1)取整片叶片/一段茎/一朵花/根,迅速用PBS 漂洗去掉泥土杂质等,部分果实需切块或液氮研磨。

(2)放入离心管或锡箔纸中并标记(单个样本量在20mg以上),迅速放入液氮中冷冻处理至少 15min.

(3)取出后迅速放入自封袋中(每组一袋),在自封袋中放入标签纸注明样本信息。

(4)-80℃冰箱冻存。寄样需足量干冰。



细胞样本收集


1.悬浮细胞:

(1)连同培养基转移到进口的15 mL的离心管中,低速离心,使细胞沉淀于离心管的底部(达到1*106个数量以上细胞为宜)。

(2)倒掉培养基(尽量倒干净)后(可以用PBS快速清洗一次,再次离心,倒掉PBS(尽量倒干净)。

(3)将离心管的尖端插入液氮中,淬灭细胞。

(4)-80度冰箱冻存,寄样需足量干冰 

2.贴壁细胞:

(1)快速倒掉培养基,倒入PBS(若用移液枪加,则靠着培养皿壁加入,以免将细胞冲起),清洗一次,倒掉PBS.

(2)用移液器吸尽残余的PBS,将培养皿底部(外壁)接触液氮,淬灭细胞。

(3)加入500微升甲醇-水(4:1,V/V),用细胞刮刀将细胞刮下,用移液枪转移至1.5 mL的离心管中。

(4)再向培养皿中加入500微升甲醇-水(4:1,V/V),将剩余的细胞尽量全部转移至1.5 mL的离心管中。

(5)-80冰箱冻存。寄样需足量干冰。



微生物样本收集


微生物样本:

1)连同培养基转移到进口的15 mL的离心管中,低速离心,使细菌沉淀于离心管的底部(达到1*108个以上数量细菌为宜)。

(2)倒掉培养基(尽量倒干净)后,用PBS溶液快速清洗一次,4 ℃ 1000 g离心10 min收集菌体,弃上清。

(3)将离心管的尖端插入液氮中,淬灭细菌1 min.

(4)-80冰箱冻存。寄样需足量干冰。



微生物培养液样本收集


微生物培养液:

方法一:

(1)培养好的菌液混匀后,取2mL菌液,用0.2μm孔径的过滤膜进行快速抽滤,去除菌体。

(2)将滤液按 50uL/管进行分装(单个样本量在20μL以上)。

(3)-80冰箱冻存。寄样需足量干冰。

方法二:

(1)培养好的菌液混匀后,取2mL菌液。

(2)3000rpm,4℃离心10min,取上清分装单个样本量在20μL以上)。

(3)-80冰箱冻存。寄样需足量干冰。


补充说明:以上仅为常规样本收集和保存方法,特殊样本或特殊分析服务(如辅酶A测定等特殊物质的靶向定量,或如氧化脂肪酸,氧化还原代谢物等特殊服务),请添加下方谱领生物服务号咨询详情并获取方案。

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